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巨噬細胞培養

 

巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進(jìn)行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活23周,多用做原代培養,難以長(cháng)期生存。

巨噬細胞也建有無(wú)限細胞系,大多來(lái)自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。

培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細胞,以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用,其法如下:

1、實(shí)驗前三天,向小鼠腹腔內注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯lml(勿注入腸內?。?,以刺流產(chǎn)生大量的巨噬細胞。
2
、引頸處死小鼠。
3
、手提鼠尾將其全浸入70%乙醇中35秒。
4
、置動(dòng)物于解剖臺,用針頭固定四肢,持鑷撕開(kāi)腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁,把皮膚拉向上下兩側,暴露出腹膜壁。
5
、用70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時(shí)用手指從兩側壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內流動(dòng)。
6
、用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側.使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內。
7
、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8
、4250g離心10分鐘后,去上清,加10ml Eagle培養基。
9
、計數細胞。每只鼠可產(chǎn)生2030×106細胞,其中90%為巨噬細胞。
10
、以3×105個(gè)貼附細胞/平方厘米接種。
11
、接種數小時(shí)后,除去培養液,可去除其它白細胞,純化培養細胞,用Eagle液沖洗12次,再加新Eagle培養液置CO2溫箱中。