各種肌組織均可用于培養,以心肌和骨骼肌較實(shí)用。
(-)骨骼肌細胞培養
1、出生1一2天的乳鼠,引頸處死。
2、無(wú)菌取大腿肌組織,切成0.3一0.5cm2小塊后,用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25%胰蛋白酶消化,無(wú)菌紗網(wǎng)或紗布濾過(guò)。
3、計數調整細胞密度。
4、快接種量2×106/皿入培養基培養。
5、培養基內含10%小牛血清,可加1%的胎汁以促進(jìn)分化。
接種在膠原或膠原的底物上能促進(jìn)細胞分化,明膠配置:用Hanks液配成0.01%明膠。
該細胞接種率約50%,細胞生長(cháng)開(kāi)始呈紡錘形,培養50-52小時(shí)后出現融合形成肌細胞狀多核纖維。數日后融合停止,此時(shí)可觀(guān)察到橫紋,一般在融合后二、三天內能見(jiàn)到收縮現象。
(二)心肌細胞培養
心肌細胞是最早的培養材料,Carrel曾長(cháng)期培養過(guò)心肌組織,至今心肌仍不失為好的培養物,最常用的是雞胚心肌。
心肌比較容易培養和生長(cháng),可用懸滴培養、組織塊培養和消化培養法,均可獲良好的效果。取心室肌培養較好,原代培養的雞胚心肌呈紡錘形,培養成功時(shí),一周后可見(jiàn)節律性收縮現象。