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腎小球分離、移植培養

 

SD大鼠頸椎脫臼法處死,75%乙醇浸泡12分鐘,2次,置超凈臺內,打開(kāi)腹腔取出腎臟剪碎,置含Hank's液的無(wú)菌培養皿洗滌,置80目不銹鋼篩網(wǎng)上。用扁平自制小鏟輕輕碾磨產(chǎn)物微小組織透過(guò)篩網(wǎng),濾過(guò)組織Hank's液混合物用吸管吸至120目不銹鋼篩網(wǎng),濾過(guò),去小組織塊,濾過(guò)物吸至200目不銹鋼篩網(wǎng),輕輕濾過(guò),Hank's液洗滌1次,收集網(wǎng)上腎小球,鏡下觀(guān)察為分離良好的腎小球。

腎小球用0.2%胰酶、0.1%膠原酶,37消化20分鐘,加血清終止胰酶反應,離心除去膠原酶。處理過(guò)的腎小球計數后接種至24孔培養板或25ml培養瓶,使腎小球大于60個(gè)/cm2,加培養基510ml(培養基組成:F12—3T3上清11;5%馬血清;2.5%胎牛血清;胰島素5μg/ml;25ng/ml氫化可的松;5μg/ml轉鐵蛋白;25ng/ml前列腺素E1;甲狀腺素0.02ng/ml;D-纈氨酸150ng/ml)腎小球培養810天,去除腎小球未生長(cháng)組分,細胞繼續培養24小時(shí),形態(tài)學(xué)觀(guān)察:細胞生長(cháng)成單層多角型細胞,直徑約100μm。