一、原理:

細胞周期指細胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個(gè)周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。

單個(gè)細胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。

BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養基后，可做為細胞DNA復制的原料，經(jīng)過(guò)兩個(gè)細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期，則染色體中約一半為兩條單體均淺染，另一半為一深一淺。細胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期，則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例，就可算出細胞周期的值。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器、用品：同常規細胞培養
2、試劑：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2×SSC液

三、操作步驟

1、細胞生長(cháng)至指數期時(shí)，向培養液中加入BrdU，使最終濃度為10μg/ml。
2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。
3、48小時(shí)后常規消化細胞至離心管中，注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。
4、常規染色體制片（見(jiàn)第三部分：染色體技術(shù)）。
5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6、棄去2×SSC液，流水沖洗。
7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。
8、鏡檢100個(gè)分裂相，計第一、二、三、四細胞期分裂指數。
9、計算：
細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時(shí)）