一、
細胞培養條件
細胞英文名稱(chēng)：3LL
中文名稱(chēng)：小鼠肺癌細胞系
生長(cháng)特性：貼壁
培養體系：DMEM+10%FBS
傳代方法：建議第一次 1:2 傳代
傳代情況：2 天換液
凍存條件：細胞庫無(wú)血清凍存液
備注
收集瓶中培養基，留作過(guò)渡培養
二、細胞收到后處理
細胞在培養瓶中培養至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到
細胞回到自己的實(shí)驗室后，先打開(kāi)外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內，嚴
格無(wú)菌操作，培養箱靜置 2-4 小時(shí)。鏡下觀(guān)察：未超過(guò) 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養
液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過(guò) 80%匯合度時(shí)，
根據情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養瓶的話(huà)，處理
完后放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外
一瓶用自己配的完全培養基）
三、細胞培養步驟
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養基
混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 4-6mL 完全培養基后吹勻。然
后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入 6cm 皿中），培養過(guò)夜。第二
天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化
1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，
輕敲幾下培養瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補加
1-2mL 培養液后吹勻。
4. 按 5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養液
的新皿中或者瓶中。PS：若客戶(hù)收到 2ml 小管細胞，收到細胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或
安全柜內，嚴格無(wú)菌操作；將小管細胞轉移至 T25 培養瓶或 6cm 培養皿，加入 5ml 左右完
全培養基混勻，放入培養箱過(guò)夜培養后查看細胞密度：若密度未超過(guò) 80%，換液繼續培養，
視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò) 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
售后服務(wù)告知書(shū)
一、收到細胞處理方法
1. 收到細胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置若干小時(shí)（視細胞密度而定）穩
定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收
細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下
細胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方
進(jìn)行售后的依據。
2. 收到細胞未開(kāi)封，出現污染狀況我們負責免費重發(fā)一次細胞。
3. 由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素的影響，故本公司只保證客戶(hù)收到細胞
后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后是需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和
發(fā)現問(wèn)題后與客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于 7 天。
4. 如客戶(hù)對細胞的種類(lèi)、純度、活性等特性有疑問(wèn)，需提供相應的生物學(xué)實(shí)驗檢測結果作
為依據
