一、實(shí)驗材料：

粗糙脈孢霉（lys+ 野生型）Neurospora crassa  CCTCC AF 2014012

粗糙脈孢霉（lys- 缺陷型）Neurospora crassa CCTCC AF 2014014

二、粗糙脈孢霉的性質(zhì)與生活史：

粗糙脈孢霉屬于真菌中的子囊菌綱，是低等的真核生物。每一菌絲細胞中含有幾十個(gè)細胞核。是遺傳分析好材料:子囊孢子是單倍體，其表型直接反應其基因型；一次只分析一個(gè)減數分裂的產(chǎn)物；體積小，易培養，繁殖快，一次雜交就能產(chǎn)生大量的后代，便于獲得正確的統計學(xué)結果；能進(jìn)行有性生殖，其染色體的結構和功能類(lèi)似于高等動(dòng)植物；更加重要的是，子囊孢子在子囊中的線(xiàn)性排列順序與減數分裂中期染色體在赤道板兩側的排列順序相同，這就是粗糙脈孢霉成為了遺傳分析的好材料。

三、著(zhù)絲粒作圖與遺傳分析：

利用四分子分析法，測定基因與著(zhù)粒間的距離稱(chēng)為著(zhù)絲粒作圖。

著(zhù)絲粒作圖是基于這樣的事實(shí)：減數分裂中在同源染色體的一對非姊妹染色單體的著(zhù)絲粒和某雜合基因座間有沒(méi)有發(fā)生交換，和其產(chǎn)物四分子中的等位基因在排列方式上是不同的?？煞譃閮煞N：

四、實(shí)驗步驟：

1. 雜交接種與培養：

野生型菌株（Lys+，A）ⅹ缺陷型（Lys-，a）

2. 壓片觀(guān)察子囊：（注意觀(guān)察時(shí)期）

1）將附有子囊果的濾紙放入裝有來(lái)蘇爾溶液的培養皿中

2）取一張載玻片，滴1-2滴來(lái)蘇爾，用接種針將子囊果挑出，放在載玻片上

3）蓋上另一張載玻片，用手指壓片，將子囊果壓破

4）顯微鏡觀(guān)察，統計各種類(lèi)型子囊的數量，每人統計200個(gè)左右的子囊

教學(xué)建議：

五、教學(xué)建議

粗糙脈孢霉培養基（PDA 培養基）

馬鈴薯浸取液1L

[注] 馬鈴薯浸取液：取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1.0升煮沸30分鐘，濾去馬鈴薯塊，將濾液補足至1.0升。

葡萄糖20g

瓊脂15g

自然pH

按上述配方配制PDA培養基，也可以通過(guò)試劑公司購買(mǎi)合成的PDA培養基，按說(shuō)明書(shū)配制。

粗糙脈孢霉雜交培養基

斜面的配制：按比例取用上述培養基，加入瓊脂后需加熱沸騰至瓊脂完全溶解于馬鈴薯浸取液中，然后分裝至試管。試管規格：18*180，每支試管加入10ml上述瓊脂完全溶解的培養基液體。121度，滅菌20min。滅菌完成后

熱迅速加入100ul賴(lài)氨酸(100mg/ml)溶液至每支試管，混勻后擺制斜面。

賴(lài)氨酸溶液的配制方法：取0.5g賴(lài)氨酸粉末溶解于5ml無(wú)菌水中,待完全溶解后取0.22um孔徑的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾除菌后備用。

最佳保存條件：不用于實(shí)驗時(shí)，可于室溫保存2周左右。