| 備注 |
培養基配方：Y187菌株是Clontech公司開(kāi)發(fā)的GAL4系統酵母單雜，雙雜實(shí)驗用菌株，MATα型，可直接轉化質(zhì)?；蚺cMATa型酵母菌株（Y2HGold，AH109等）通過(guò)mating操作進(jìn)行篩庫試驗。，Transformationmarker為:trp1,leu2，報告基因為：lacZ,MEL1。Y187--‐GAL4酵母雙雜系統需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標志為T(mén)RP1，用于表達DNA--‐BD(來(lái)自酵母轉錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒PGADT7的篩選標志為L(cháng)EU，用于表達AD(GAL4C端768~881位氨基酸)與目標蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4系統原理：一個(gè)完整的酵母轉錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個(gè)結構域：位于N端1~174位氨基酸區段的DNA結合域（DNA--‐BD）和位于C端768~881位氨基酸區段的轉錄激活域(AD)。DNA--‐BD能夠識別GAL4--‐responsivegene的上游激活序列UAS，并與之結合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉錄。BD和AD單獨存在不能激活轉錄，但當二者接近時(shí)，則呈現完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉錄表達。正常條件下，BD不與AD結合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成bait融合蛋白（bait--‐BD）和prey融合蛋白（prey--‐AD），如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會(huì )促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉錄。Y187有兩個(gè)報告基因：lacZ,MEL1，分別由兩種不同的啟動(dòng)子（G1，M1）啟動(dòng)，這兩種啟動(dòng)子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分均不同，大大降低了酵母雙雜假陽(yáng)性發(fā)生的概率.Y187菌株可用YPDA在28℃有氧的條件下培養，使用30%的甘油保藏菌種。；使用說(shuō)明：nan；質(zhì)控示例：nan |
