NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）基本信息：
NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來(lái)的一株白細胞介素-2依賴(lài)型NK細胞株。NK-92MI是轉染得到的源自NK-92的IL-2非依賴(lài)的NK細胞株，親本細胞通過(guò)微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進(jìn)行轉化?？赡苡捎谳d體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。NK-92細胞有以下特征：CD2,CD7,CD11a,CD28,CD45,CD54表面標記陽(yáng)性，
NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）特性：
1）來(lái)源：50 years
2）形態(tài)：淋巴母細胞
3）含量：>1x106 個(gè)/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基）。
6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養步驟
一．NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養基及培養凍存條件準備：
1）MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
2）培養條件：Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%，Temperature: 37℃。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
4）Medium Renewal：every 2 to 3 days
5）Applications：The cell line is cytotoxic to a wide range of malignant cells; it kills both
一．NK-92MI [NK92MI]（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）注意事項：
1. NK-92和NK-92MI細胞均為懸浮生長(cháng)，大部分細胞聚集成團，少數分散的細胞，并且細胞間隙會(huì )有較多的死細胞和細胞碎片；
2. NK-92和NK-92MI細胞對營(yíng)養需求很高，建議使用進(jìn)口胎牛血清和馬血清培養，白介2的質(zhì)量對NK-92的生長(cháng)影響很大，正常培養時(shí)換液周期為2天，建議使用半量換液和離心換液交替進(jìn)行，即半量換液1-2次后離心全量換液一次，盡量減少離心次數；
3. 細胞生長(cháng)時(shí)聚集的細胞團會(huì )逐漸增大，正常的細胞團顯微鏡下為白色透亮的，若細胞聚集太多，出現細胞團中部發(fā)暗時(shí)可在換液后將細胞團輕輕搖散，或者用移液器輕輕吹散，吹打力度不可過(guò)大，否則會(huì )出現大量死細胞和細胞碎片。這個(gè)細胞沒(méi)有聚團的活性很低。細胞對營(yíng)養要求也很高，千萬(wàn)不能團塊太大營(yíng)養不足，不然48小時(shí)細胞就會(huì )死亡。這個(gè)細胞計數是不準確的 因為細胞成團長(cháng)，團塊不可能吹散計數，還有就是散落的細胞細胞活性不好，所以細胞檢測活性也是不準確的。
4. 運輸條件可能會(huì )對細胞造成一定的影響，收到細胞后請按以下方法處理：
a) 收到細胞后靜置，顯微鏡下觀(guān)察細胞并拍照，主要找聚集的細胞團；
b) 將培養瓶豎置，靜置4~6h，肉眼觀(guān)察大部分細胞團都沉到底部后，將多余的培養基輕輕倒入50ml離心管中離心收集一部分細胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右時(shí)可換用移液器吸取上清，保證大部分細胞團留在瓶中），補加3~4ml新鮮培養基進(jìn)行培養，若細胞量較多可分兩瓶，離心收集的細胞也可單獨接種培養；
c) 細胞對機械損傷特別敏感，所以最好是不要離心
5. 細胞復蘇時(shí)不能離心處理，提前準備一個(gè)離心管，加10ml培養基，把溶解后的凍存細胞接入，靜置2小時(shí)左右，細胞都沉降在底部，去上清，用完全培養基接到T25培養瓶?jì)冗M(jìn)行培養
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養細胞時(shí)請注意
(1)傳代時(shí)細胞的接種密度應控制在 1萬(wàn)-4萬(wàn) 活細胞/平方厘米。
(2)選用高質(zhì)量的胎牛血清配制培養液。
