人急性髓母白血病細胞（Kasumi-1）介紹：人急性髓母白血病細胞（Kasumi-1），該細胞復蘇后需要兩周左右恢復正常生長(cháng)。
1） 來(lái)源：男性，外周血
2） 形態(tài)：懸浮生長(cháng)
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。
人急性髓母白血病細胞（Kasumi-1）用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基）。
6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1） 準備1640培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%；Gluta-max（invitrogen 35050） 1%；雙抗，1%。
2） 注意事項：
a) 該細胞復蘇后成活率較低，會(huì )出現大量死細胞和死細胞碎片，培養兩周后有所好轉。建議每1-2周對細胞進(jìn)行1000rpm, 5mins離心，棄掉上清，加入新鮮完全培養液，可以去掉部分細胞碎片和顆粒。培養過(guò)程中會(huì )出現死細胞和細胞碎片，收到郵寄的活細胞的用戶(hù)若發(fā)現培養物內有部分死細胞和細胞碎片，此為正?，F象。
b) 細胞培養過(guò)程中會(huì )有輕微聚團，輕輕吹打開(kāi)即可。當細胞密度較大或者培養液變黃時(shí)，需要及時(shí)進(jìn)行半換液或者完全換液。
c) 該細胞對血清質(zhì)量較為敏感，我庫建議您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養。
d) 請注意保持細胞密度在合適的范圍（3x105 ~ 3x106 /ml），不能過(guò)稀。
3） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
4） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶(hù)需要自己決定。
3） 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
