中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）（CHO-K1）描述：中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）（CHO-K1）是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細胞的亞克隆。在本庫通過(guò)支原體檢測。

中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）（CHO-K1）特性
動(dòng)物種別：中國倉鼠

性別：雌

組織來(lái)源：卵巢

形態(tài)：上皮細胞

細胞馴化前的培養基的培養條件：F12K培養基(SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

供應限制：僅供研究之用。

中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）（CHO-K1）馴化： 

復蘇CHO-K1細胞轉入T25 cm2細胞培養瓶，以F12K基礎培養基添加10%血清培養，待細胞長(cháng)滿(mǎn)單層后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，傳代至裝有完全培養基的T25 cm2細胞培養瓶（Corning）中繼續培養，當細胞鋪滿(mǎn)瓶底時(shí)，即得貼壁 CHO-K1 細胞。取貼壁CHO-K1 細胞，換液，加入15 mL含血清的完全基和 15 mL無(wú)血清CHO-K1專(zhuān)用培養基，2天后吸出一半培養液，加入等量的無(wú)血清CHO-K1，每2天重復一次此操作，直到胎牛血清濃度低于 1 %后，以基礎培養基B001 繼續培養，即培養基中血清濃度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。細胞在無(wú)血清CHO-K1專(zhuān)用培養基中密度達到5 ×106cells/ mL時(shí)，即得懸浮 CHO-K1 細胞。培養條件：37℃，5 % CO2培養箱中靜置培養。

 運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。

 細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3） 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng)，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基）。

6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

中國倉鼠卵巢細胞（懸浮細胞）（CHO-K1）培養步驟：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備：無(wú)血清CHO-K1專(zhuān)用培養基；谷氨酰胺，1%，雙抗，1%，細胞專(zhuān)用培養基：推薦CHO-K1-001。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90% CHO-K1專(zhuān)用培養基，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶(hù)需要自己決定。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3） 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。    

1，細胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。