一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介

1、細胞名稱(chēng)：PC-12(高分化)；大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞

2、生長(cháng)特性：□ 貼壁  □ 懸浮  □半懸浮半貼壁

3、細胞生長(cháng)條件：

培養條件：1640+10%FBS+1%雙抗

溫度：37℃

空氣條件 ：5% CO2，,95% AIR

傳代方法：1:2傳代，2~3天換液

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

4、背景資料：該細胞系來(lái)自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經(jīng)生長(cháng)因子(NGF)受體。NGF可誘導產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細胞不合成腎上腺素。

二．使用方法

1、您收到細胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時(shí)以穩定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進(jìn)行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml完全培養基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞完全貼壁后，觀(guān)察培養結果，之后進(jìn)行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉入液氮中進(jìn)行長(cháng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

5、T25瓶細胞處理方法

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請即時(shí)聯(lián)系。并進(jìn)行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩定細胞狀態(tài)。

3.預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4.顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5.①若細胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進(jìn)行傳代。

②若細胞密度較大，達到80%以上，將細胞傳代培養。

注：培養瓶里的培養基血清濃度為5%，建議更換成自己配好的新鮮培養基。由于運輸過(guò)程中的問(wèn)題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀(guān)察會(huì )出現細胞懸浮的情況，這時(shí)請在拍照后將懸浮的細胞即時(shí)離心，加15%血清的完全培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時(shí)原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的完全培養基。（這里是針對原來(lái)完全培養基FBS濃度是10%的情況，如果原來(lái)FBS濃度是20%，可以增加到25%FBS濃度）   收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳或培養中遇到問(wèn)題，煩請當天盡快聯(lián)系并提供圖片，以便售后處理。7天內反饋，細胞本身問(wèn)題免費重發(fā)如人為原因導致可根據實(shí)際情況酌情處理；7天內未接到任何反饋視為合格，不予免費售后。