細菌培養是一種用人工方法使細菌生長(cháng)繁殖的技術(shù)。細菌在自然界中分布極廣,數量大,種類(lèi)多,它可以造福人類(lèi),也可以成為致病的原因。大多數細菌可用人工方法培養,即將其接種于培養基上,使其生長(cháng)繁殖。培養出來(lái)的細菌用于研究、鑒定和應用。
細菌培養是一個(gè)復雜的技術(shù)。培養時(shí)應根據細菌種類(lèi)和目的等選擇培養方法、培養基,制定培養條件(溫度、pH值、時(shí)間,對氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養基上,做分離培養。再進(jìn)一步對所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下,37℃中放18~24小時(shí)生長(cháng)。厭氧菌則需在無(wú)氧環(huán)境中放2~3天后生長(cháng)。個(gè)別細菌如結核菌要培養1個(gè)月之久。
由于細菌無(wú)處不在,因此從制備培養基時(shí)開(kāi)始,整個(gè)培養過(guò)程必須按無(wú)菌操作要求進(jìn)行,否則外界細菌污染標本,會(huì )導致錯誤結果;而培養的致病菌一旦污染環(huán)境,就會(huì )引起交叉感染。
以光合細菌培養方法為例。光合細菌培養的方法,按次序分為容器、工具的消毒,培養基的制備,接種和培養管理四個(gè)步驟。
(一)容器、工具的消毒。
(二)培養基的制備
1.培養用水
如果培養的光合細菌是淡水種,菌種培養可用蒸餾水,生產(chǎn)培養可用消毒的自來(lái)水(或井水)配制。如果培養的光合細菌是海水種,則用天然海水配制培養基,注意在海水中加入磷元素時(shí),不能用磷酸氫二鉀,應用磷酸二氫鉀,不然會(huì )產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒
菌種培養用的培養基應連同培養容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養可把配好的培養液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉(或漂白液)消毒后使用。
3.培養基配制
根據所培養種類(lèi)的營(yíng)養需要選擇合適的培養基配方。按培養基配方把所需物質(zhì)稱(chēng)量,逐一溶解,混合,配成培養基。也可先配成母液,使用時(shí)按比例加入一定的量即可。
(三)接種培養基配好后,應立即進(jìn)行接種。光合細菌生產(chǎn)性培養的按種量比較高,一般為20%~50%,即菌種母液量和新配培養液雖之比為1∶4~1∶1,不應低于20%,尤其是微氣培養,接種量更應高些,否則光合細菌在培養液中很難占絕對優(yōu)勢,影響培養的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。
(四)培養管理光合細菌的培養過(guò)程中,管理工作包括日常管理操作和測試,生長(cháng)情況的觀(guān)察、檢查以及出現問(wèn)題的分析處理等三個(gè)方面。
培養成敗標準
生長(cháng)情況的觀(guān)察和檢查光合細菌生長(cháng)情況的好壞是培養成敗的標準。在培養過(guò)程中,可以通過(guò)觀(guān)察菌液的顏色及其變化來(lái)了解光合細菌生長(cháng)繁殖的大體情況,菌液的顏色是否正常,接種后顏色是否由淺變深,均反映光合細菌是否正常生長(cháng)繁殖以及繁殖速度的快慢。必要時(shí)可通過(guò)顯微鏡檢查,了解情況。