細胞培養環(huán)境主要要求：無(wú)菌無(wú)毒。

創(chuàng )造局部無(wú)菌最簡(jiǎn)便的方法：使用超凈工作臺或生物安全柜。

細胞無(wú)菌室要求：

①密封的房間、有空調過(guò)濾機組和通風(fēng)系統

②有更衣室、風(fēng)淋室、緩沖間

③無(wú)菌室使用前后需經(jīng)過(guò)紫外燈輻照30分鐘消毒殺菌

④人員、物品進(jìn)入無(wú)菌室也需相應的消毒處理

根據空氣潔凈度不同，無(wú)菌室分為百級、千級、萬(wàn)級、十萬(wàn)級和三十萬(wàn)級。根據2010版GMP規定，無(wú)菌室分為A級、B級、C級、D級。細胞培養過(guò)程中常用設備：

電子天平

結構簡(jiǎn)單，稱(chēng)量的原理和秤原理是一樣的，和秤不同的是，電子天平量程小，精準度高。

PH計

結構由機體和電極筆構成；電極筆內部參比液是3mol/L的氯化鉀，保護液是飽和氯化鉀溶液。

純水機

由過(guò)濾柱、反滲透膜、數顯控制板組成，純水機可制得蒸餾水和超純水。

高溫高壓滅菌鍋

滅菌原理：密閉環(huán)境，加熱產(chǎn)生水蒸汽，鍋內冷空氣經(jīng)排氣閥排出后，關(guān)閉排氣閥，由于水蒸汽無(wú)法排出，鍋內壓力增加，沸點(diǎn)升高，形成高溫環(huán)境，菌體蛋白質(zhì)變性，從而達到滅菌的效果。

二氧化碳培養箱

結構：與普通生化培養箱相比，增加了密封性，通入CO2氣體。CO2氣體由外接氣瓶連接。

注意事項：

①氣瓶上有兩個(gè)氣壓表，右邊氣壓表是指氣瓶?jì)葔毫?，左邊氣壓表是進(jìn)入到培養箱內氣壓。

②培養箱參數是設置好的，分別是37℃，5%CO2。

③培養箱內有飽和硫酸銅溶液水盆，應定期加入無(wú)菌水，定期更換飽和硫酸銅溶液。

倒置顯微鏡

結構：倒置顯微鏡與普通的光學(xué)顯微鏡在結構上相反，光圈在上面，物鏡在載物臺下面。

使用步驟：

①打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調節光圈亮度

②避開(kāi)物鏡用酒精棉球擦拭載物臺

③培養瓶或培養皿可以直接放在載物臺上觀(guān)察細胞

④使用結束后，光圈調至最暗，關(guān)上電源，蓋上防塵布。

超凈工作臺

超凈工作臺僅適于制備培養基和其他無(wú)菌試劑及培養非靈長(cháng)類(lèi)細胞

根據氣流方向分為水平流超凈工作臺和垂直流超凈工作臺，我們實(shí)驗室使用的超凈工作臺是垂直流超凈工作臺。

生物安全柜

根據氣流方向和排風(fēng)系統分為三級生物安全柜，實(shí)驗室使用的是2級生物安全柜。

生物安全柜和超凈工作臺的區別：

生物安全柜能夠完全保護工作人員、樣品并防止交叉污染的發(fā)生；

超凈工作臺只是保護操作對象而不保護工作人員和實(shí)驗室環(huán)境的潔凈工作臺。

液氮罐

液氮罐一般分為液氮貯存罐和液氮運輸罐。

主要用于低溫貯藏細胞和菌株凍存管，液氮溫度低至-196℃，使用過(guò)程需做好防護措施。

超低溫冰箱

本實(shí)驗室超低溫冰箱主要用于細胞、菌株凍存及短期保藏，設置溫度為-80℃，高溫報警溫度為-73℃，低溫報警溫度為-85℃。