細胞在體外培養過(guò)程中需要每天進(jìn)行常規檢查和顯微鏡觀(guān)察，及時(shí)了解細胞生長(cháng)狀態(tài)、數量改變、細胞形態(tài)、細胞有無(wú)移動(dòng)、有無(wú)污染、培養液pH是否變酸、變黃是否更換等。細胞常規檢查觀(guān)察的內容為：
一、肉眼觀(guān)察
一般常規檢查用肉眼即可觀(guān)察，主要看培養液的顏色和透明度的變化。正常情況下，培養液pH介于7.2～7.4之間，呈桃紅色清亮透明。加入細胞在培養瓶中置一般溫箱培養時(shí)，隨著(zhù)細胞生長(cháng)時(shí)間的延長(cháng)，細胞代謝產(chǎn)生的酸性產(chǎn)物會(huì )使培養液pH值下降，引起顏色變淺變黃。在超越緩沖范圍后培養液酸化變黃，如不及時(shí)調節pH，會(huì )影響細胞的生長(cháng)，甚至造成細胞退變死亡。所以，一旦發(fā)現培養液變黃，應及時(shí)換液傳代。一般更換培養液的時(shí)間，依營(yíng)養物的消耗而定，正常情況生長(cháng)穩定的細胞2～3天換液一次，生長(cháng)緩慢的細胞3～4天換液一次。培養液中加Hepes或用5%CO2溫箱培養可使pH維持穩定，利于細胞生長(cháng)。用含磷酸鹽緩沖系統培養時(shí)，可因瓶及塞子漏氣，CO2溢出，也可能由于培養瓶塞洗刷不潔、殘留堿性物，使培養液變堿發(fā)紅，只致使細胞難以生長(cháng)，甚至死亡。細胞換液傳代后，若發(fā)現培養液很快變黃，要注意是否有細菌污染或培養器皿沒(méi)有洗干凈。貼壁細胞培養時(shí)若出現混濁，多為污染。懸浮培養的細胞，應將瓶豎起靜置1小時(shí)，若培養基混濁示為污染，也可在顯微鏡下仔細觀(guān)察有無(wú)污染現象出現。
二、顯微鏡觀(guān)察
生長(cháng)良好的細胞，在顯微鏡下可觀(guān)察到細胞透明度大，折光性強，輪廓不清。相差顯微鏡觀(guān)察時(shí)可見(jiàn)細胞部分細微結構。若細胞生長(cháng)狀態(tài)不良，可見(jiàn)細胞輪廓增強，細胞折光性變弱，細胞胞質(zhì)中出現空泡、脂滴和其他顆粒狀物質(zhì)，細胞之間空隙增大，細胞形態(tài)不規則，甚至失去原有細胞的特點(diǎn)，產(chǎn)生圓縮脫落，有時(shí)細胞表面及周?chē)霈F絲絮狀物。若細胞營(yíng)養不良狀況沒(méi)有得到及時(shí)糾正，進(jìn)一步發(fā)展可見(jiàn)到部分細胞死亡，崩解漂浮在培養液中。發(fā)現這種情況應及時(shí)處理，只有生長(cháng)良好的細胞才能進(jìn)行傳代培養和實(shí)驗研究。
三、細胞的生長(cháng)狀態(tài)
細胞培養時(shí)，經(jīng)初代培養或傳代培養，都有一長(cháng)短不同的潛伏期，在培養過(guò)程中注意觀(guān)察細胞增殖生長(cháng)的狀態(tài)極為重要。各種細胞增殖的時(shí)間不盡一致。傳代細胞系，胚胎組織或幼體細胞潛伏期短，一般在接種培養第二天即可見(jiàn)細胞生長(cháng)增殖，3～4天便可連接成片。成體組織的潛伏期長(cháng)，老年組織和癌組織潛伏期更長(cháng)，可達一周左右。原代細胞培養中最先可見(jiàn)從組織塊中邊緣“長(cháng)出”細胞，這種細胞是從原代組織塊中游走出來(lái)的，并不是細胞增殖產(chǎn)生。這種早期游出的細胞多以成纖維細胞為主，其易生長(cháng)，適應性強，呈放射狀或旋渦狀分布，很快生長(cháng)并互相連接成網(wǎng)狀。傳代細胞在傳代后，一般經(jīng)過(guò)懸浮、貼壁伸展很快進(jìn)入潛伏期，對數生長(cháng)期，細胞大量繁殖，逐漸相連成片而長(cháng)滿(mǎn)瓶底。一旦發(fā)現細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底80%就應及時(shí)傳代，否則會(huì )影響細胞生長(cháng)甚至脫落。懸浮細胞當發(fā)現生長(cháng)顯著(zhù)、密度增大、分布稠密、培養液變黃時(shí)也應及時(shí)傳代。
四、微生物污染
細胞接種、傳代、換液加藥后應經(jīng)常觀(guān)察，密切注意是否有微生物污染發(fā)生。一旦發(fā)現培養液混濁、液體內漂浮著(zhù)菌絲或細菌，或生長(cháng)明顯變緩，胞質(zhì)內顆粒增多，有中毒表現等應懷疑是否有微生物污染，進(jìn)一步觀(guān)察檢查并及時(shí)處理。
