一、準備工作
準備工作對開(kāi)展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節的疏忽可導致實(shí)驗失敗或無(wú)法進(jìn)行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。
二、取材
在無(wú)菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實(shí)驗目的而定），經(jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細胞株的擴大培養則無(wú)取材這一過(guò)程。機體取出的組織細胞的首次培養稱(chēng)為原代培養。
理論上講各種動(dòng)物和人體內的所有組織都可以用于培養，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材后應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時(shí)應嚴格保持無(wú)菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過(guò)程稱(chēng)為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進(jìn)行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進(jìn)入培養器皿后，立即放入培養箱中，使細胞盡早進(jìn)入生長(cháng)狀態(tài)。
正在培養中的細胞應每隔一定時(shí)間觀(guān)察一次，觀(guān)察的內容包括細胞是否生長(cháng)良好，形態(tài)是否正常，有無(wú)污染，培養基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。
原代培養一般有一段潛伏期（數小時(shí)到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過(guò)了潛伏期后細胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(cháng)期。細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底后要進(jìn)行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱(chēng)為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無(wú)限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無(wú)惡性。
四、凍存及復蘇
為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，最終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進(jìn)行培養。
凍存過(guò)程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時(shí)溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。
五、常用儀器設備
無(wú)菌室,超凈工作臺,三重純水蒸餾器,抽氣泵,壓力蒸氣消毒器,電熱恒溫培養箱,培養器具，CO2培養箱,恒溫水浴鍋,倒置顯微鏡,離心機,無(wú)菌過(guò)濾器,洗刷裝置,細胞計數板和電子細胞技術(shù)儀等等。
