產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，其主要毒力因子為外毒素，是引起家畜(牛、羊、兔)壞死性腸炎和腸毒血癥的病原體。
近日一篇發(fā)表于Vaccines期刊的文章中，研究人員以pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei(干酪乳桿菌為抗原遞送載體，表達產(chǎn)氣莢膜梭菌α，ε，β1和β2類(lèi)毒素)為誘餌顆粒疫苗，隨后，用飼料原料將表達四價(jià)類(lèi)毒素的重組益生菌制成誘餌顆粒，作為口服疫苗免疫，進(jìn)一步評價(jià)了α，β誘餌顆粒疫苗和ε天然外毒素口服免疫家兔的免疫原性和免疫保護效果。
研究人員首先以增強型綠色熒光蛋白(EGFP)為標記篩選重組乳酸菌，結果表明，pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei細胞表面有明顯的綠色熒光，而pPG-T7g10/L.casei細胞表面無(wú)明顯的綠色熒光，表明EGFP呈結構性表達。隨后，研究人員對重組質(zhì)粒pPG-α-β2-ε-β1在干酪乳桿菌中的片段穩定性進(jìn)行了評價(jià)。結果表明，重組乳酸菌具有良好的穩定性，沒(méi)有目的基因的丟失，也沒(méi)有任何結構重排。
如何評價(jià)重組乳酸菌對消化環(huán)境的耐受性呢？研究人員進(jìn)行了重組干酪蛋白pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei對膽汁、高滲環(huán)境、模擬胃環(huán)境和腸液環(huán)境的耐受性試驗。結果發(fā)現，重組乳酸菌對極端消化環(huán)境具有一定的耐受性。在高滲環(huán)境(9%NaCl 5h)、0.5%膽鹽5h和模擬胃環(huán)境(pH1.5)3h的極端環(huán)境中，pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei的存活率分別保持在約50%、25%和25%。
淋巴細胞增殖與細胞免疫呈正相關(guān)。研究人員于初次免疫后第35天收集各組兔脾淋巴細胞，用純化的α，β-1、β-2或ε類(lèi)毒素蛋白進(jìn)行二次刺激。結果發(fā)現，與pPG-T7g10/L.casei組和pBS組相比，口服含有pPG-E-α-β2-ε-β1/L.casei的誘餌顆粒疫苗的家兔有顯著(zhù)的淋巴增殖作用。
為了評價(jià)誘餌顆粒疫苗對產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素的免疫保護作用，用產(chǎn)氣莢膜梭菌(A、C、D型毒素)與外毒素混合物聯(lián)合攻擊家兔，攻擊試驗表明，誘餌顆粒疫苗對家兔產(chǎn)生的產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素具有較好的免疫保護作用?？诜T餌顆粒疫苗的家兔存活率為80%，肌肉注射商品滅活產(chǎn)氣莢膜弧菌疫苗的存活率為60%，而pPG-T7g10/L.casei組和PBS組全部死亡。
綜上所述，用組成性表達α，ε，β-1和β-2類(lèi)毒素的重組乳酸菌制備的口服誘餌顆粒疫苗能有效誘導抗原特異性的粘膜和體液免疫應答，可防止注射壓力，這表明該誘餌益生菌疫苗是一種很有前途的產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗接種策略。
